Purificação de Proteína verde fluorescente por meio de Cromatografia de Afinidade com Íon Metal Imobilizado (IMAC) e sua relevância para estudantes de Ciências Biomédicas durante aulas de Bioquímica na Universidade La Trobe – Austrália

Alex Jose José de Melo Silva, Lumar Lucena Alves, Julian Pakay

Resumo


Este trabalho foi realizado como prática integrada da disciplina de Bioquímica no curso de graduação em Ciências Biomédicas, objetivando demonstrar técnicas utilizadas para a purificação da Proteina Fluorescente Verde (GFP).  Para realização dos experimentos foi utilizada como metodologia principal a Cromatografia de Afinidade por Metal Imobilizado (IMAC). A região de abertura para alongamento da GFP foi subclonada dentro de um vetor de expressão chamado pQE30. A produção subsequente da proteína marcada com hexahistidina na região N-terminal, facilitou sua purificação pela IMAC. Uma purificação de aproximadamente três vezes mais que a esperada da GFP foi obtida. Dessa forma, os estudantes completaram o curso adquirindo significante experiência em relação às técnicas fundamentais na área molecular relacionadas à clonagem e princípios de expressão e purificação de proteínas recombinantes.

Palavras-chave


GFP; Purificação; IMAC

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DOI: https://doi.org/10.16923/reb.v14i3.638

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